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第1章　绪论1

1.1　分析生物化学的重要性3

1.1.1　过程分析和监测3

1.1.2　重大发现4

1.1.3　生命科学研究5

1.2　分析方法的选择6

1.2.1　方法选择的基本原则6

1.2.2　选择前应了解的信息7

1.2.3　分析的一般步骤8

1.2.4　仪器分析8

1.2.5　生理学分析9

1.2.6　诊断试剂盒检测10

1.3　实验数据的变异及其处理10

1.3.1　偶然误差10

1.3.2　系统误差12

1.4　方法可靠性的评估14

1.4.1 精密度14

1.4.2　准确度17

1.4.3　专一性21

1.4.4　灵敏度22

1.4.5　定量限22

1.4.6　线性范围22

1.4.7　耐用性23

1.5　质量管理和控制23

1.5.1　Shewart平均值质量控制法24

1.5.2　Cusum质量控制法25

1.6　样品的保存与处理26

1.7　实验结果处理和报告27

1.7.1　实验原始记录和标签27

1.7.2　计量单位的挑选27

1.7.3　标准曲线27

1.7.4　检测报告28

参考文献29

第2章　电泳学基础30

2.1　移动界面系统31

2.1.1　静止浓度界面31

2.1.2　强电解质构成的MBS32

2.1.3　弱电解质形成的MBS34

2.1.4 MBS在电泳中的应用34

2.2　移动反应界面39

2.2.1 强电解质形成的MRB39

2.2.2　弱电解质形成的MRB40

2.2.3　判别式42

2.2.4 Deman-Rigole's方程43

2.2.5　静止反应界面43

2.2.6　Pospichal方程44

2.2.7　应用44

2.3　基本电泳模式47

2.3.1 区带电泳47

2.3.2　等速电泳48

2.3.3　等电聚焦电泳49

2.4　符号及其意义50

参考文献52

第3章　凝胶电泳55

3.1　醋酸纤维素薄膜电泳56

3.1.1　原理56

3.1.2　方法57

3.1.3　应用58

3.2　聚丙烯酰胺凝胶电泳59

3.2.1　原理59

3.2.2　类型59

3.2.3　条件选择60

3.2.4　应用61

3.3 十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳62

3.3.1　原理62

3.3.2　方法63

3.3.3　运行条件67

3.3.4　电泳结果处理67

3.3.5　应用68

3.4　琼脂糖凝胶电泳68

3.4.1　琼脂糖化学68

3.4.2　核酸电泳68

3.4.3　染色69

3.4.4　免疫电泳70

3.4.5　应用70

3.5　等电聚焦电泳71

3.5.1 原理71

3.5.2　载体两性电解质71

3.5.3　方法73

3.5.4　条件选择75

3.5.5　应用76

3.6 双向电泳77

3.6.1　概述77

3.6.2　双向电泳原理77

3.6.3　模式选择77

3.6.4　应用78

3.7 印迹技术78

3.7.1 基本原理78

3.7.2 DNA印迹法79

3.7.3 RNA印迹法79

3.7.4　蛋白质印迹法80

3.8　新进展81

3.8.1 脉冲场凝胶电泳81

3.8.2　单细胞凝胶电泳82

3.8.3　变性梯度凝胶电泳82

参考文献83

第4章　高效毛细管电泳85

4.1　仪器86

4.1.1 毛细管87

4.1.2　高压电源87

4.1.3　检测器87

4.1.4　数据采集处理系统89

4.1.5　柱恒温系统89

4.2 电渗流90

4.2.1 电渗流形成机理90

4.2.2　电渗流的影响因素90

4.3 电泳模式91

4.3.1　毛细管区带电泳91

4.3.2　毛细管等速电泳91

4.3.3　毛细管等电聚焦电泳92

4.3.4　胶束电动毛细管色谱93

4.3.5　非水相毛细管电泳93

4.3.6　毛细管凝胶电泳94

4.4　进样方式95

4.4.1 电动进样95

4.4.2　压力进样95

4.4.3　扩散进样95

4.4.4　流动注射进样96

4.5　分离条件选择96

4.5.1　分离条件选择策略96

4.5.2　无机离子97

4.5.3　手性物质97

4.5.4　蛋白质98

4.5.5　核酸99

4.6　应用99

4.6.1　药物分析99

4.6.2　环境分析101

4.6.3　临床分析102

4.6.4　蛋白质分析103

4.6.5　核酸分析104

4.6.6　多糖分析104

4.7 新进展105

4.7.1　阵列毛细管电泳105

4.7.2　芯片毛细管电泳106

参考文献106

第5章　PCR技术109

5.1　基本原理和方法110

5.1.1　基本过程110

5.1.2　反应体系的组成与反应条件112

5.1.3　材料设备及试剂113

5.1.4　操作步骤114

5.1.5　模板的制备114

5.1.6 PCR扩增产物分析117

5.1.7　PCR产物的纯化118

5.2　PCR的引物设计119

5.2.1　引物设计的基本原理119

5.2.2　引物设计的基本原则119

5.3 PCR常见问题122

5.3.1　假阳性及解决方案122

5.3.2　PCR污染的预防措施123

5.3.3　假阴性及解决方案124

5.4 常用基本操作方法及主要用途125

5.4.1 反转录PCR125

5.4.2 多重PCR127

5.4.3 套式PCR128

5.4.4 不对称PCR128

5.4.5 反向PCR129

5.4.6 锚定PCR129

5.4.7 标记PCR和彩色PCR129

5.4.8 免疫PCR130

5.4.9 原位PCR技术130

5.4.10 实时荧光定量PCR131

5.5 PCR技术的应用132

5.5.1 PCR在生物学领域的应用132

5.5.2 PCR技术在医学检验中的应用132

参考文献133

第6章　核酸序列分析135

6.1　核酸的多态性分析136

6.1.1 DNA长度多态性分析136

6.1.2　微卫星DNA分析139

6.1.3　单核苷酸多态性分析140

6.1.4　微生物群落核酸多态性分析142

6.2　芯片杂交技术145

6.2.1 基因芯片的种类与制作方法146

6.2.2　样品与芯片的分子杂交149

6.2.3　生物芯片的光学检测和数据处理142

6.2.4　生物芯片应用150

6.3 DNA序列分析152

6.3.1　传统的测序方法152

6.3.2　新一代454测序法156

6.3.3 DNA测序技术的发展与展望158

参考文献159

第7章　酶联免疫吸附分析160

7.1 基础知识161

7.1.1　抗原161

7.1.2　抗体161

7.1.3　抗原抗体反应162

7.1.4　标记免疫分析164

7.1.5　酶免疫测定164

7.2　原理与方法164

7.2.1 基本原理164

7.2.2 ELISA方法165

7.3 ELISA仪器168

7.4 ELISA试剂169

7.4.1　免疫吸附剂169

7.4.2　结合物172

7.4.3　底物174

7.4.4　洗涤液175

7.4.5　终止液175

7.4.6　对照品175

7.4.7　标准品176

7.5　操作要领176

7.5.1　样品的采集与保存176

7.5.2　试剂的准备177

7.5.3　加样177

7.5.4　保温177

7.5.5　洗涤178

7.5.6　显色178

7.5.7　比色179

7.5.8　结果判断179

7.6　应用181

7.6.1 临床诊断181

7.6.2　生命科学研究182

7.6.3　预防医学182

参考文献183

第8章　蛋白质分析184

8.1　蛋白质化学185

8.1.1 氨基酸185

8.1.2　肽键186

8.1.3　一般性质186

8.1.4　蛋白质结构187

8.2　蛋白质浓度测定188

8.2.1　凯氏定氮法188

8.2.2　紫外吸收法189

8.2.3　Lowry法及其改进方法191

8.2.4　考马斯亮蓝法192

8.3　蛋白质纯度分析192

8.3.1　纯度鉴定原则192

8.3.2　常用纯度检测方法193

8.4　分子量测定194

8.4.1 SDS-PAGE法194

8.4.2　凝胶过滤色谱法194

8.4.3　生物质谱法195

8.5 蛋白质等电点测定195

8.5.1 凝胶等电聚焦电泳法195

8.5.2　毛细管等电聚焦电泳法196

8.5.3　聚焦色谱法197

8.6　C端分析197

8.6.1 羧肽酶法197

8.6.2　肼解法198

8.7　N端分析198

8.7.1 FDNB法199

8.7.2　DNS-Cl法199

8.7.3　Edman降解法200

8.8 肽谱分析201

8.9 氨基酸组成分析202

8.9.1　蛋白质水解202

8.9.2　氨基酸衍生203

8.9.3　氨基酸分离检测205

8.10　蛋白质结构分析206

8.10.1　一级结构分析206

8.10.2　二级结构分析207

8.10.3　三级结构分析208

8.10.4　亚单位分析209

8.10.5　二硫键分析210

参考文献211

附录212